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多肽修飾

多肽修飾

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 多肽是生物體內(nèi)實(shí)現(xiàn)各種功能的活性物質(zhì),多肽修飾主要是肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)和側(cè)鏈基團(tuán)的修飾。通過修飾能夠改變肽類化合物的物理化學(xué)性質(zhì),優(yōu)化其在體內(nèi)的有效利用。經(jīng)過修飾的多肽類藥物,能夠顯著降低免疫原性、減少毒負(fù)作用、增加水溶性、延長體內(nèi)作用時(shí)間、改變體內(nèi)分布狀況等等。常見的肽修飾包括:C末端修飾、N末端修飾、中間殘基修飾,以及環(huán)化修飾。
除了常規(guī)線性肽之外,北科納米(Synthbio)現(xiàn)足以滿足您對(duì)多種環(huán)肽、修飾肽和特殊肽的需求,包括:N/C端修飾、抗原肽、熒光標(biāo)記、環(huán)肽、生物素標(biāo)記和PEG化等。合生生物提供的多肽修飾(peptide modification)服務(wù)包含但不局限于以下類型:


1.酰胺化和乙酰化

如果合成多肽為蛋白質(zhì)的內(nèi)部序列,通過N端乙酰化或C端酰胺化可以去除多肽電荷使其更趨向于蛋白質(zhì)的自然結(jié)構(gòu),同
時(shí)增強(qiáng)了多肽對(duì)肽鏈內(nèi)切酶的抵抗力。
2、生物素及FITC標(biāo)記
針對(duì)羧基端生物素標(biāo)記的多肽,需要在其羧基端添加賴氨酸,然后將生物素連接在賴氨酸的側(cè)鏈上,這樣就消除了賴氨.
酸的正電荷。FITC是熒光標(biāo)記的活性前體。為了有效的標(biāo)記N端,可在多肽的N端和熒光基團(tuán)之間插入七碳的6-氨基己酸。
3、二硫鍵修飾
在半胱氨酸殘基間形成二硫鍵可以實(shí)現(xiàn)多肽環(huán)化,但由于二硫鍵是隨機(jī)形成的,因此對(duì)于含多個(gè)半胱氨酸殘基的多肽來說,
這是個(gè)挑戰(zhàn)。合生生物可在指定的半胱氨酸間構(gòu)建二硫鍵,我們更多可以在一條多肽定位引入三對(duì)二硫鍵。
4、多種磷酸化
多肽磷酸化可以幫助研究磷酸化對(duì)多肽和蛋白結(jié)構(gòu)的影響以及蛋白激酶的作用機(jī)理,合生生物已經(jīng)成功地為客戶合成了大
量的絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等磷酸化多肽。對(duì)于序列中含有多個(gè)含羥基的氨基酸(S,T,Y),可以通過正交保護(hù)或使用被Fmoc保護(hù)的磷酸化氨基酸原料來實(shí)現(xiàn)序列中磷酸化氨基酸的選擇性。
5、甲基化修飾
蛋白質(zhì)的甲基化被認(rèn)為是一種重要的修飾,有助于調(diào)節(jié)細(xì)胞功能,如轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞分裂和細(xì)胞分化。翻譯后氮-甲基化通常發(fā)
生在賴氨酸或精氨酸側(cè)鏈上。甲基化修飾蛋白的多肽可用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究、或X射線晶體學(xué)結(jié)構(gòu)測(cè)定。合生生物可以合成含有單個(gè)、二個(gè)、三個(gè)甲基化賴氨酸的多肽,其純度可達(dá)>98%,并且也可以和其他甲基化修飾組合。

6、KLH, BSA,OVA多肽偶聯(lián)
多肽抗原由于分子太小而不能產(chǎn)生顯著的免疫反應(yīng),因此需要將多肽抗原偶聯(lián)到BSA、OVA、KLH等較大的蛋白載體上。
KLH由于在ELISA或Western blotting檢測(cè)中沒有抑制作用,所以不影響檢測(cè)結(jié)果。常用的偶聯(lián)原理是馬來酰亞胺法,即將多肽中的半胱氨酸殘基與載體蛋白偶聯(lián)。因此合成抗原多肽時(shí),在其N端或C端添加一個(gè)半胱氨酸殘基有利于多肽與載體蛋白的偶聯(lián)。
注:KLH是一種很大的凝聚蛋白(MW =4*105-1*107),由于它特殊的大小及結(jié)構(gòu),其水溶性有限,往往樣品會(huì)呈現(xiàn)
溶液狀或者含絮狀的混懸液,但這并不影響免疫原性。
7、聚乙二醇(PEG)修飾
PEG聚合體具有非離子性的、無毒性的、無生物排斥、高親水性的等,PEG修飾通過化學(xué)方法將PEG聚合物偶聯(lián)到大分子
上(抗體、多肽等)。PEG修飾的大分子具有較高的溶解性(主要可用于疏水**物)及生物藥效,可通過偽裝多肽,騙過宿主細(xì)胞的免疫系統(tǒng),來增強(qiáng)多肽的治療效果。它也可以通過降低腎臟清除率來延長多肽的代謝時(shí)間。
8、穩(wěn)定同位素標(biāo)記
為了進(jìn)行核磁共振實(shí)驗(yàn),合生生物將多肽標(biāo)記穩(wěn)定的非放射性的同位素。標(biāo)記2H、15N、13C或15N及13C同時(shí)標(biāo)記的多
肽,合成后可以便于核磁共振檢測(cè)。如果您需要標(biāo)記修飾,請(qǐng)?zhí)峁┠男蛄屑皹?biāo)記需求。
9、復(fù)合抗原肽修飾
多抗原肽(Multiple-Antigen peptide,MAP)是生產(chǎn)高效價(jià)的抗多肽抗體和多肽疫苗的一種有效方法。多重抗原肽以賴
氨酸的a-或e-基團(tuán)形成主鏈,以多拷貝的肽抗原作外表層的分枝狀合成多肽。根據(jù)賴氨酸的數(shù)目,可以合成不同數(shù)目側(cè)鏈的多抗原肽,這樣不必將抗原偶聯(lián)到載體蛋白質(zhì)便能產(chǎn)生高滴度、高親和力的抗體。








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